TIEPO DE PROTROMBINA

TIEPO DE PROTROMBINA

La protrombina tiene un peso molecular aproximado de 75000. La protrombina es una a(alfa)-1-globulina que se sintetiza en el hígado y requiere para su síntesis a la vitamina k.

Esta prueba mide la actividad coagulante del sistema extrínseco incluyendo fibrinógeno, protrombina y factores v, vii y x. Además permite registrar los efectos de anticoagulantes y también se emplea en el diagnóstico de trastornos de la coagulación congénitos y adquiridos.

FUNDAMENTO

Cuando el calcio y un extracto de tejido de cerebro(factor iii, fosfolípidos y proteínas y que constituyen una tromboplastina completa) son añadidos al plasma, inmediatamente el factor vii reacciona con el factor tisular para formar un complejo el cual transforma al factor x en su forma activada xa; este reacciona con el factor v, calcio y los fosfolípidos presentes en el extracto de tejido para dar origen a la protrombinasa extrínseca, la cual transforma a la protrombina en trombina; esta se convierte al fibrinógeno en fibrina.

La velocidad de formación de la fibrina depende de la concentración de los factores v, vii, x, protrombina, fibrinógeno, por lo tanto la prueba valora la actividad de la totalidad de estos factores, es decir, los que participan en la vía extrínseca, excepto el factor xiii.

Esta prueba mide la cantidad de complejo protrombínico existente en el plasma, cuando se hace reaccionar dicho complejo con una cantidad conocida de tromboplastina y cloruro de calcio.

OBJETIVOS

Evaluar el tiempo de protrombina en plasmas normales y patológicos.

MATERIAL

• ·         Tubos de ensayo con citrato de sodio 3.8%.
• ·         Baño María con termostato.
• ·         Pipeta serológica 0.1ml
• ·         Pipeta serológica de 1.0ml.
• ·         Pipeta serológica de 5.0ml.
• ·         Pipeta Pasteur con bulbo.
• ·         Gradilla.
• ·         Cronómetro.
• ·         Jeringa o equipo vacutainer.

·         REACTIVOS: 

Ø  Anticoagulante citrato de sodio al 3.8%.

Ø  CaCl2 0.02m

Ø  Tromboplastina activada.

Técnica:

   1)      2.5 ml de sangre en tubo con anticoagulante de citrato. Se invierten para mezclarlos. Se centrifuga 5 mins. A 2500 rpm y se separa el plasma y se mantiene en refrigeración hasta el momento de hacer la prueba.

   2)      Homogenizar adecuadamente el reactivo de tromboplastina.

   3)      Transferir a un tubo la cantidad de cloruro de calcio suficiente para el número de pruebas a efectuar y mantenerlo a una temperatura de 37°C en el baño de incubación. 

   4)      Añadir 0.1ml de plasma a un tubo e incubar durante dos mins.

   5)      Posteriormente agregar 0.1ml de tromboplastina activada(previamente incubada durante 10 mins.) y colocar la mezcla en el baño de incubación a 37°C.

   6)      Agregar 0.1ml de cloruro de calcio 0.02M a la mezcla de plasma y tromboplastina, y simultáneamente poner en marcha el cronómetro.

    7)      Agitar inmediatamente la mezcla y mantenerla en el baño de incubación a 37 °C. Es necesario revisar constantemente la apariencia de la mezcla y para ello se debe contar con buena iluminación para observar oportunamente la aparición de los primeros filamentos de fibrina; este es el momento final de la prueba y se detiene la marcha del cronómetro.

    8)      Se extraen los tubos y se mantienen cerca de una fuente luminosa, se inclina suavemente 1 ó 2 veces y se observa la formación de los primeros filamentos de fibrina que indican el punto final, deteniendo en este momento el cronómetro.