PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA

PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA

Objetivo
En esta prueba se busca detectar la presencia de aquellos anticuerpos que pueden llegar a sensibilizar a los eritrocitos.
Esta prueba es de utilidad para los siguientes casos:
-Al efectuar pruebas de compatibilidad
-Para detección e identificación de anticuerpos anormales
-Para demostrar antígenos no demostrables por otras técnicas, como la variante D^u, Kell, Duffy, Kidd, etc.
-Para detectar e identificar anticuerpos en eluídos
-Para estudios especiales y/o de investigación

Material
-4 tubos de ensaye 10x75 mm
- Gradilla
- 2 pipetas Pasteur
-Solución salina 0.85%
-Muestra  sanguínea a revisar
- Eritrocitos controles 1,2,3 y 4 para detección de anticuerpos
-Albumina bovina 22%
-Suero de anti-globulina humana (suero de Coombs)
-Control de Coombs

Procedimiento
Se divide en dos fases:
1^ra.- Se incubara el suero a investigar con los eritrocitos control para detección de anticuerpos, con el fin de la sensibilización de los mismos, lo que habría de ocurrir si el suero contiene anticuerpos atípicos.
2^da.- Se comprueba si la sensibilización ha ocurrido; se practica seguidamente la prueba de Coombs para confirmar.

-Primera fase
1.- Una vez que se tiene la muestra sanguínea procede a separar sus componentes, eritrocitos y suero, en caso de que no contenga anticoagulante.
2.- Una vez separados se colocan dos gotas de suero a revisar en cada uno de los cuatro tubos, marcándolos con las siglas A, B, C y D.
3.- Se lavan dos gotas de cada uno de los controles de eritrocitos 1, 2 , 3 y 4.
4.- Una vez lavados se coloca una gota de los eritrocitos lavados a su respetivo tubo; 1-A, 2-B, 3-C, 4-D.

5.- Se centrifugan (15 seg. a 3,400rpm) y se leen los resultados. De ser negativos proseguir.
6.- Incubar los tubos por 15 min. a temperatura ambiente. Si son negativos proseguir.
7.-  Agregar 2 gotas de albumina bovina a los tubos e incubar a 37° C por 15 min., centrifugar nuevamente (15 seg. a 3,400rpm) y leer resultados. Si son negativos proseguir.

-Segunda fase
8.- Se lavan 4 veces con solución salina 0.85% cada tubo. Los lavados serán 3min. a 3,400rpm.
9.- Se agregan  dos gotas de suero de Coombs a cada tubo. Se vuelven a centrifugar y se leen los resultados.
10.-  A cada tubo que no presento aglutinación, se le agrega una gota de control de Coombs. Debiendo exhibir después una reacción positiva de aglutinación.

Interpretación de resultados
Si los tubos presentan aglutinación sin el control de Coombs significara una resultado positivo.