TIEMPO DE LISIS DE EUGLOBULINAS

TIEMPO DE LISIS DE EUGLOBULINAS

En la fracción euglobulínica del plasma, se encuentra el fibrinógeno, el plasminógeno y las fibrinolisinas. Esta técnica suprime los inhibidores del plasminógeno. Las fibrinolisinas del glóbulo rojo destruidas aceleran la lisis pero se encuentra en cantidades muy constantes, en cambio existe variación en la fibrinólisis plasmática
Si el paciente cursa con un cuadro de fibrinólisis aumenta, los activadores presentes en dicha reacción transformaran el plasminógeno en plasmina y esta última actuara sobre la fibrina formada de manera acelerada.

FUNDAMENTO:

La fracción euglobulínica del plasma por dilución y acidificación, está relativamente libre de sistema enzimático fibrinólitico. La desaparición del coagulo va a significar la lisis de euglobulinas y por lo tanto en un indicio de la presencia de plasmina y/o de los activadores del plasminógeno.

OBJETIVO:

Valorar el componente fibrinolítico

MATERIAL:

6 tubos de ensayo
pipetas sexológicas de 0.2, 1.0 y 5.0 ml
Aplicadores de madera
Gradilla
Matraz Erlenmeyer de 50 ml
Papel sanitario
Papel parafilm
Baño de incubación.

REACTIVOS:

Ácido clorhídrico 1.0 N
Amortiguador de imidazol pH 7.3
Trombina diluida (sol. De trabajo 1:10)
Ácido acético 1%
cloruro de calcio 0.025 M

TECNICA A:

1.    En un tubo de ensayo de 13 x 100 mm colocar:

1.2 ml de agua destilada
0.15 ml de ácido clorhídrico
0.3 ml de plasma problema

2.    Tapar el tubo con papel parafilm y agitarlo por inversión suavemente.

3.    Centrifugar 300 rpm durante 5 minutos.

4.    Desechar el sobrenadante.

5.    Agregar 0.3 ml de amortiguador de imidazol.

6.    El precipitado se resuspende con un aplicador previamente mojado en amortiguador de imidazol.

8.    Agregar 0.1 ml de trombina diluida.

9.    Agitar el tubo suavemente, taparlo con papel parafilm y colocarlo en baño de incubación 37°C.

10. Observar la formación del coagulo cada 10 minutos.

TECNICA B:

1.    En un matraz Erlenmeyer de 50 ml agregar 19 ml de agua destilada.

2.    Adicionar 1.0 ml de plasma de 0.35 ml de ácido acético a 1%.

3.    Reposar 4°C durante 10 minutos.

4.    Agitar y repartir en 4 tubos de volúmenes iguales.

5.    Centrifugar a 3500 rpm durante 5 minutos.

6.    Decantar el sobrenadante y secar la pared interna de los tubos con papel filtro.

7.    Redisolver con 1ml de amortiguador de imidazol.

8.    Colocar en baño de incubación 37°C.

9.    Coagular con 2 gotas de cloruró de calcio 0.025 M o 0.1 ml de trombina.

10. Observar la lisis del coagulo en las 2 primeras horas.

VALORES DE REFERENCIA:

El coagulo debe permanecer formado más de 90 minutos.