DETERMINACIÓN DE TROMBINA

DETERMINACIÓN DE TROMBINA

INTRODUCCION:

La trombina es la enzima que transforma el fibrinógeno en fibrina. El calcio acelera esta reacción, pero no es añadido a la prueba. La velocidad de coagulación col la trombina es una función de la concentración de fibrinógeno. La trombina es una globulina que tiene un PM de 37, 700 daltons.

Consta de 2 cadenas de longitud desigual unida por un puente disulfuro. La cadena A de la trombina contiene 49 residuos de aminoácidos y no contienen carbohidratos; de la cadena B tiene 225 residuos y deriva de la terminal  C dela protrombina y contiene el centro activo de enzima (residuos de serina).

FUNDAMENTO:

Mide el tiempo de coagulación del plasma citrato en presencia de trombina, explora la última fase de la coagulación. Se encuentra alargado el tiempo de trombina cuando el fibrinógeno se encuentra disminuido, o bien, está presente la heparina o productos de degradación de fibrinógeno y fibrina en cantidades importantes.

OBJETIVOS:

Emplear una prueba rápida para determinar la concentración de fibrinógeno, detectar la presencia de productos de la degradación del fibrinógeno o de la fibrina.

MATERIAL:

Tubos de ensayo
Pipetas 1.0 ml
cronometro
Gradilla
Baño de incubación
Tubo citrato

REACTIVOS
 Solución salina
Trombina humana de 50 unidades

TÉCNICA:

1.    Reconstruir la trombina humana de 50 unidades con 1.0 ml de solución salina fisiológica (s.s.f.), tomar 0,5 ml de esta y llevarla a 10 ml con s.s.f (reactivo de trombina). Asegurarse que con un plasma normal de tiempo de trombina esta entre 18-22 segundos.

2.    Poner 0.2 ml del reactivo de trombina en incubarlo 2 minutos a 37°C.

3.    Agregar 0.2 ml de plasma citrato, poner el cronometro en marcha y anotar el tiempo de coagulación.

RESULTADOS:

Anotar el tiempo de la formación del coagulo.

VALORES DE REFERENCIA:

18 – 22 segundos

La prolongación de tiempo de trombina se presenta cuando hay una deficiencia de fibrinógeno o bien la presencia de un inhibidor de la reacción de trombina- fibrinógeno.