CONTEO DE LEUCOCITOS

CUENTA DE LEUCOCITOS     

En la sangre normal pueden distinguirse los siguientes tipos de leucocitos.

Granulocitos: neutrófilos, eosinófilos y basofilos.

Agranulocitos: linfocitos y monocitos.

La producción de linfocitos es en sitios determinados(bazo, ganglios linfáticos y otros tejidos linfáticos organizados), pero la producción de neutrófilos y monocitos, eosinofilos y basófilos, esta limitada a la medula osea en el ser humano.

El examen de los leucocitos comprende dos fases técnicas. Una es la fase cuantitativa que determina el numero de leucocitos, las cifras absolutas y relativas de las diversas formas de globulos blancos, y la segunda, que determina morfología celular.

En ocaciones basta su examen para formular un diagnostico especifico, por ejemplo en las leucemias. Con mas frecuencia puede ser ayuda diagnostica para establecer el pronostico en relación al curso de la enfermedad.

FUNDAMENTO

La sangre es diluida con una solución hipotónica de acido acético glacial mas un colorante como medio de contraste(liquido de Turk), que lisa los globulos rojos maduros, pero, los leucocitos permanecen intactos. Su nucleo se tiñe ligeramente. Los normoblastos no se destruyen, cuando se encuentran presentes; como es el caso de algunas situaciones patológicas, por lo tanto lo que se debe tomar en cuenta para no incluirlos en el valor verdadero de globulos blancos.

MATERIALES

 Ø  Pipetas de toma

 Ø  Tubos de ensayo de 13x100mm

 Ø  Cámara de Neubauer

 Ø  Boquillas

 Ø  Gradilla

 Ø  Papel parafilm

 Ø  Papel higienico

MATERIAL BIOLOGICO

Sangre capilar o venosa con anticoagulante

EQUIPO                                                                  

 Ø  Microscopio                                                          

 Ø  Agitadores de pipeta

REACTIVOS

 Ø  Solución EDTA al 10%

 Ø  Liquido de Turk

 Ø  Etanol al 70%

TECNICA

  1)      Homogenizar perfectamente bien la sangre

  2)      con la pipeta de Thoma para globulos blancos, aspirar sangre hasta la marca de 0.5; secar cuidadosamente la parte exterior de la punta de la pipeta.

  3)      Completar con el liquido de Turk hasta la marca de 11(dilución 1:20)

  4)      Agitar por 2 minutos. 

  5)      Desechar las primeras 4 o 5 gotas y se carga la cámara de Neubauer.

  6)      Se deja reposar la cámara con la muestra durante 3 minutos.

  7)      Observar con el microscopio utilizando el objetivo 10x

  8)      Se cuentan los leucocitos en cada uno de los cuatro cuadros de 1mm^2 de las esquinas de la cuadricula de la cámara de Neubauer.

CALCULOS

Para obtener la cifra de leucocitos por mm^2 se emplea la siguiente formula:

N X 20 X 10 = N X 50 = leucocitos/mm^3

        4

                 

En donde:

N   =  numero de leucocitos contados

20 =  Factor de diulcion

10 =  corrección por altura de la cámara

4   =  numero de cuadros de 1mm^2 en los que se efectuo el conteo de leucocitos.

El factor de 50 variara si cambia la dilución y/o el numero de cuadros contados.

Valor de referencia

4,500  -  10,000/mm^3                      4.5  - 10 x 10^9/L